武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

 三．实验材料

   仪器设备：1．酒精灯、三角烧瓶，培养皿；2．镊子、剪刀、剖针；3．双筒解剖显微镜；4．光照培养箱或温室；

   材料烟1草无菌苗、豌豆幼苗。

   试剂

   （1）MS培养基，植物激1素：NAA、6-BA等；

   （2）饱和漂液（次氯1酸钠）；

   （3）70%酒精、酒精、酒精棉球；

   （4）无菌水

   四．实验步骤

   豌豆苗的茎尖培养

   ⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株，简取1厘米左右的茎尖，浸入70%的酒精中1分钟，再浸入饱和次氯1酸钠溶液中消毒15分钟，（此步以后要求无菌）用无菌水中冲洗5次，在灭菌的滤纸上吸干水分，放入灭菌的培养皿中。

3. 洗涤

材料经固定后,PBS或双蒸水冲洗约3小时。（20，30，30，60）

4. 脱水

材料依次经80%、90%、、各级乙醇溶液脱水，各30min

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，1好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在80%酒精中。

7. 包埋

包埋时，用镊子夹取石蜡模子（金属质地）在酒精灯上稍加热，放在平的桌面上，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入少许石蜡。再将镊子稍加热，夹取材料将切面朝下放入蜡模中，排列整齐。再放上包埋盒，轻轻倒入熔蜡。

8. 切片

①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。

②将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。

③摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。

④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。

⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为4-10微米。

⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-50r/min。