武汉默沙克生物科技 elisa

武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

　双抗1体夹心法是检测抗原1常用的方法，操作步骤如下：

　　1）将特异性抗1体与固相载体联结，形成固相抗1体。洗涤除去未结合的抗1体及杂质。

　　2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗1体结合，形成固相抗原抗1体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

　　3）加酶标抗1体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗1体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗1体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

3、  细胞培养上清

取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，elisa，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

4、  细胞裂解液

1）  吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2）  收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

3）  加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。

　　双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗1体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗1体和酶标抗1体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab"）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。

　　双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

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