湖北elisa试剂盒的生产电话 默沙克生物科技公司
武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品,空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔,在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。4)吸取匀浆液到离心管,4℃5000×g离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
2、 血浆
用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血1脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
12.水洗
用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝(或放入碱性水中也可),但要注意流水不能过大,以防切片脱落。
13.分化
将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色,约2秒至数十秒钟。见切片变红,颜色较浅即可。
14.漂洗
切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。
15.脱水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各5min。
16、复染
用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。
伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏1木1精染细胞核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应淡染。重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序因各种抗1体而异,称为可变区,分别用VH和VL表示。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染,促使细胞质容易着色,并且经乙醇脱水时不易褪色。
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