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武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
3. 洗涤
材料经固定后,PBS或双蒸水冲洗约3小时。(20,30,30,60)
4. 脱水
材料依次经80%、90%、、各级乙醇溶液脱水,各30min
注意事项:
(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分。
(2)在更换高一级的脱水剂时,1好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂。
(3)在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体。
(4)在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片。
(5)如需过夜,应停留在80%酒精中。
(6)脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色混浊现象
5.透明(环保透明脱蜡液)武汉默沙克
纯酒精、二甲本等量混合液15min,二甲本Ⅰ60min、Ⅱ30min(至透明为止)。
由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲本既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲本以过渡。当组织中全部被二甲本占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态。
透明注意事项
(1)使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。
(2)更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿气。
(3)在透明过程中, 如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱净,应退回纯酒精中重新脱水,然后再透明。
17.脱水Ⅱ
将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水乙醇中3-5min。后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18.透明
切片放入二甲本Ⅰ、Ⅱ中各5min。
二甲本应尽量保持无水,应经常更换,或用纱布包无水硫1酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲本中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。
19.封藏:中性树胶封存
因切片经二甲本透明,使用中性树胶作为封藏剂,树胶可用二甲本稀释至合适的稠度。
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